Imagerie time-lapse pour surveiller la propagation transcellulaire de protéines de type prion dans les nématodes transgéniques

Prenez les nématodes transgéniques qui sont maintenus au même stade de développement.

Les cellules musculaires de la paroi corporelle de ces nématodes expriment des protéines semblables à des prions, qui sont marquées d’une protéine fluorescente rouge et localisées dans des vésicules acides.

Les protéines de type prion sont mal repliées, agrégeant des protéines associées aux maladies neurodégénératives.

Ensuite, transférez les nématodes sur un tampon d’agarose contenant des nanoparticules polymères et une solution anesthésique.

Les effets combinés des nanoparticules et de la solution anesthésique immobilisent les nématodes sur le tampon d’agarose.

Placez une lamelle sur le tampon d’agarose et scellez-le.

Maintenant, positionnez l’ensemble de tampon d’agarose avec les nématodes sous un microscope confocal et réglez les paramètres d’imagerie appropriés.

Acquérir des images en accéléré des protéines marquées par fluorescence dans les nématodes pour surveiller le transport vésiculaire des protéines de type prion à l’intérieur et entre les cellules musculaires de la paroi corporelle.

Après avoir préparé des lignées transgéniques synchronisées de contrôle et de domaine prion de C. elegan