Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 5:36 min • July 8th, 2025
Commencez par un échantillon de tissu cérébral humain post-mortem congelé provenant d’un cas confirmé de maladie neurodégénérative.
Excise la matière grise riche en agrégats de protéines insolubles, une caractéristique de la maladie.
Transférez le tissu dans un homogénéisateur.
Ajouter un tampon contenant des inhibiteurs et homogénéiser pour libérer les composants intracellulaires.
Les inhibiteurs bloquent les enzymes protéase et phosphatase, empêchant la dégradation des protéines.
Transférez l’homogénat dans un tube et ajoutez un tampon de détergent ionique. Couver.
Le détergent solubilise les protéines repliées nativement, tandis que les agrégats de protéines mal repliés restent intacts.
Sonicate pour compléter la dissociation cellulaire.
Transférez l’homogénat dans un tube ultracentrifuge et centrifugez à grande vitesse.
Les agrégats se déposent au fond.
Retirez le surnageant contenant des protéines solubles dans les détergents.
Lavez les agrégats avec un tampon de détergent ionique, centrifugez-les et retirez le surnageant.
Ajoutez un tampon d’urée pour dénaturer les agrégats de protéines, les rendant solubles.
Transférez les agrégats de protéines solubilisées dans un tube et s
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