Génération d’une lésion corticale par arme blanche dans un modèle murin pour induire une astrogliose réactive

Fixez une souris anesthésiée dans un cadre stéréotaxique.

Rasez-lui la tête et désinfectez le site. Appliquez une pommade oculaire pour prévenir le dessèchement de la cornée.

Faites une incision pour exposer le crâne.

Retirez les membranes sus-jacentes et nettoyez la surface avec une solution saline.

Marquez une région sur le crâne, ciblant le cortex.

Percez le long de la région marquée. Appliquez une solution saline pour maintenir l’hydratation des tissus.

Retirez le morceau d’os desserré, exposant le cortex sous-jacent.

Placez une mousse de gel imbibée de solution saline pour éviter le dessèchement des tissus et absorber le sang.

Placez une lame stérile attachée à un porte-sonde sur le cortex. Ensuite, retirez la mousse de gel.

Abaissez la lame pour pénétrer dans le cortex et déplacez-la horizontalement en mouvements répétés pour créer une blessure mécanique.

Retirez la lame et utilisez de la mousse de gel pour absorber le sang. Suturer l’incision chirurgicale.

Sur le site de la lésion, les astrocytes subissent une gliose réactive, où ils s’activent et prolifèrent, libérant des molécules protectrices qui réduisent l’inflammation et favorisent la réparation des tissus.

Dans cette étape, placez une souris entièrement sous sédation dans le cadre stéréotaxique. Fixez son nez dans le cône nasal, qui est relié à l’isoflurane. Ensuite, serrez les barres d’oreille et assurez-vous que la tête est stable.

Rasez la tête du niveau des yeux au niveau des oreilles. Ensuite, stérilisez la peau avec trois gommages alternés d’alcool isopropylique et de solution de bétadine iodée. Ensuite, appliquez une pommade sur les deux yeux pour éviter qu’ils ne se dessèchent.

Surveillez la profondeur de l’anesthésie de l’animal en pinçant son orteil ou sa queue. La souris est dans le plan chirurgical approprié lorsqu’il n’y a pas de réponse et que la respiration est lente et régulière. Faites une incision cutanée parasagittale juste derrière les yeux jusqu’à presque le point entre les oreilles en une seule coupe ferme. Écartez la peau et coupez le côté droit avec un hémostat.

Au microscope, nettoyez la membrane sus-jacente sur le crâne à l’aide du côté émoussé du scalpel et d’applicateurs à bout de coton. Nettoyez ensuite le crâne à l’aide d’un applicateur à embout de coton trempé dans une solution saline à 0,9 % et laissez-le sécher complètement. À l’aide d’une petite règle et d’un marqueur permanent, marquez le bord antérieur de la craniotomie à 1 millimètre caudal de la suture coronale, puis marquez le bord gauche de la craniotomie à 1 millimètre latéralement de la suture sagittale.

Ensuite, marquez les bords droit et caudal de la craniotomie à 4 millimètres des sutures sagittales et coronales, respectivement. À l’aide d’un foret de 0,5, percez soigneusement le contour du marqueur permanent et assurez-vous de ne pas percer complètement le crâne. Appuyez doucement sur le morceau isolé de l’os pariétal à l’aide d’une pince. L’os aminci est prêt à être retiré lorsqu’il est suffisamment faible sur le périmètre.

Maintenant, à l’aide d’une seringue de 10 millilitres munie d’une aiguille de calibre 23, appliquez une petite quantité de solution saline à 0,9 % sur l’os isolé et la zone percée. Fixez le bras manipulateur à l’appareil stéréotaxique. Fixez ensuite une nouvelle lame de scalpel sur le porte-sonde avec le côté tranchant orienté vers le roseau.

En gardant le bras manipulateur à l’écart, soulevez délicatement le morceau d’os avec une paire de pinces coudées en insérant la pointe sur le côté de l’os et en la retirant d’un seul mouvement. Placez ensuite un petit morceau de la mousse de gel résorbable trempée sur le cerveau découvert pour l’empêcher de sécher et absorber le sang qui pourrait être présent. Une fois que la mousse de gel est placée sur le cerveau, balancez le bras manipulateur en place. Ajustez la lame pour qu’elle soit centrée sur la mousse de gel.

Retirez ensuite la mousse de gel et abaissez la lame jusqu’à ce que la pointe touche la dure-mère sans la percer. Marquez les coordonnées dorsale-ventrale à l’aide de l’échelle de vernier sur le bras vertical du cadre stéréotaxique. Ensuite, à l’aide du bras manipulateur, abaissez lentement la lame à 3 millimètres près dans le cerveau. Laissez la lame rester en place pendant 5 à 10 secondes.

Ensuite, déplacez lentement le bras stéréotaxique avec la lame dans une direction rostrale-caudale trois fois. Laissez la lame atteindre les limites rostrale et caudale de la craniotomie avant de passer à l’extrémité opposée. Ensuite, soulevez lentement le bras stéréotaxique et retirez la lame du cerveau.

Placez immédiatement un autre morceau de mousse de gel sur la surface du cerveau pour absorber tout excès de sang ou de liquide. Pendant ce temps, retirez le bras stéréotaxique et jetez la lame du scalpel. Une fois que le saignement s’est arrêté, retirez la mousse de gel.

Fermez la plaie en suturant la peau avec des sutures non résorbables, comme l’Ethilon ou le Prolene, et retirez les sutures 9 à 10 jours après l’intervention. Ensuite, administrez 0,5 à 1 millilitre de solution de Ringer lactate par voie sous-cutanée, pour assurer l’hydratation.