Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:18 min • July 8th, 2025
Prenez un cerveau de souris perfusé dans le tampon.
Le cerveau est infecté par Listeria monocytogenes résistante à la streptomycine, une bactérie pathogène.
L’étape de perfusion permet d’extraire le sang du cerveau, ce qui permet de s’assurer que les mesures de la charge bactérienne reflètent la charge de Listeria monocytogenes dans les tissus.
Ensuite, homogénéisez le cerveau à l’aide d’un homogénéisateur stérilisé pour décomposer les tissus et libérer les bactéries.
Maintenant, préparez des dilutions en série de l’homogénat cérébral à l’aide d’un tampon.
Placez ces dilutions sur des plaques de gélose pour perfusion cerveau-cœur contenant de la streptomycine, un antibiotique.
Incuber les plaques. La gélose pour perfusion cerveau-cœur fournit des nutriments pour la croissance de Listeria monocytogenes, tandis que la streptomycine sélectionne les bactéries résistantes, ne permettant à la formation que de colonies de Listeria résistantes à la streptomycine.
Comptez le nombre de colonies sur la plaque pour déterminer les unités formant des colonies, une mesure de la charge bactérienne infectieuse viable dans le cerveau.
À l’aide d’une pince, ouvrez le crâne pour exposer le cerveau et placez une spatule entre le dessous du cerveau et la base du crâne pour transférer soigneusement le cerveau dans un tube de 15 millilitres contenant 5 millilitres de 4 degrés Celsius PBS.
Dans une enceinte de biosécurité, insérez l’embout et faites fonctionner un homogénéisateur de tissus pendant 10 secondes dans des solutions séquentielles d’eau de Javel à 5 %, d’eau stérile, d’éthanol à 75 % et d’eau stérile dans des tubes coniques séparés de 15 millilitres. Lorsque l’embout a été soigneusement stérilisé, homogénéisez le cerveau infecté dans son tube.
Préparez des dilutions en série de dix fois de chaque homogénat d’organe dans du PBS stérile et placez les dilutions sur des plaques de gélose pour perfusion cerveau-cœur. Ensuite, incubez les cultures de dilution homogénate à 37 degrés Celsius pendant la nuit et comptez le nombre de colonies sur chaque plaque pour déterminer le nombre total de bactéries par organe ou millilitre de sang.