Détection de la co-localisation de l’orexine et des récepteurs cannabinoïdes chez le poisson-zèbre obèse induit par l’alimentation

Dans le cerveau du poisson-zèbre, les neurones expriment l’orexine et les récepteurs cannabinoïdes qui régulent le métabolisme.

Chez les poissons-zèbres obèses induits par l’alimentation, ou DIO, ces récepteurs se co-localisent de plus en plus pour former des hétéromères, modifiant la signalisation en aval et affectant la régulation métabolique.

Prenez des cryosections du tissu cérébral du poisson zèbre témoin et DIO. Lavez les sections avec un tampon pour enlever le support d’enrobage.

Traiter avec un tampon bloquant la perméabilisation pour perméabiliser les membranes cellulaires et masquer les sites de liaison non spécifiques. Laver pour enlever l’excès de tampon.

Incuber avec un cocktail d’anticorps primaires ciblant les récepteurs. Laver pour éliminer les anticorps non liés.

Incuber avec différents anticorps secondaires marqués au fluorophore qui se lient aux anticorps primaires. Laver pour éliminer les anticorps non liés.

Ajoutez un colorant fluorescent de liaison à l’ADN pour marquer le noyau. Ensuite, appliquez un support de montage et scellez les sections avec une lamelle.

À l’aide d’un microscope confocal, détectez la fluorescence de l’anticorps. Une co-localisation accru