Induction médiée par Cre-LoxP de malformations caverneuses cérébrales dans un modèle murin

Commencez avec un bébé souris génétiquement modifié portant le gène CCM2, qui est essentiel à la stabilité des vaisseaux sanguins.

Ce gène est flanqué de deux sites loxP. Les cellules endothéliales du chiot expriment également l’enzyme Cre recombinase fusionnée à un récepteur d’œstrogène ou ER.

Injecter par voie intragastrique du 4-hydroxytamoxifène ou du 4-HT dans le chiot.

Le 4-HT se diffuse à travers les cellules endothéliales et se lie à la partie réceptrice des œstrogènes de la protéine de fusion Cre-ER.

Cette liaison déclenche un changement de conformation qui active la Cre recombinase, qui pénètre dans le noyau des cellules endothéliales et se lie aux sites loxP.

Cela facilite l’événement de recombinaison entre les sites loxP, formant une boucle et excise le segment du gène CCM2.

La perte de CCM2 perturbe l’intégrité des cellules endothéliales, compromettant la stabilité des parois des vaisseaux sanguins.

Cela conduit au développement de structures vasculaires anormales gonflées connues sous le nom de malformations caverneuses cérébrales ou CCM, qui sont fragiles et sujettes aux fuites.

Commencez par dissoudre le 4-HT dans de l’éthanol à 100 % jusqu’à une concentration de 10 milligrammes par millilitre. Préparez des aliquotes de 30 microlitres, puis conservez-les à moins 80 degrés Celsius. Le jour de l’utilisation, diluez le 4-HT aliquote dans de l’huile de maïs à 0,5 milligramme par millilitre. Ensuite, à l’aide d’une seringue à insuline, injectez par voie intragastrique 50 microlitres de 4-HT dans des petits nouveau-nés P1 afin d’induire des lésions expérimentales de la CCM.