Obtention de suspensions cellulaires à partir de tissus cérébraux de souris ischémiques
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:47 min • July 8th, 2025
Prenez des tissus cérébraux de souris ischémiques perfusés contenant des cellules cérébrales et des cellules immunitaires infiltrées.
Émincez les mouchoirs sur une passoire et rincez avec un tampon.
Centrifuger le filtrat et jeter le surnageant.
Remettez la pastille en suspension dans une solution d’enzymes digestives et transférez-la dans un tube de microcentrifugation.
Incuber pour que les enzymes digestives décomposent la matrice extracellulaire, relâchant les cellules.
Filtrez la suspension et rincez-la avec un tampon contenant de la DNase pour éliminer l’ADN contaminant.
Ensuite, lavez avec un tampon sans DNase.
Centrifuger le filtrat et jeter le surnageant.
Remettez les cellules en suspension dans un milieu à gradient de densité. Ensuite, transférez le contenu dans un tube frais et mélangez. Centrifugeuse pour séparer les composants par densité.
Retirez le surnageant contenant la myéline et les débris.
Remettez le granulé en suspension dans un tampon sans DNase. Transférez-le dans un nouveau tube et centrifugez-le à nouveau.
Jeter le surnageant pour assurer une élimination suffisante du milieu à gradient de densité.
Enfin, mettez les cellules en suspension dans le tampon pour
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques