Détection du vieillissement neuronal dans une section organoïde corticale

Commencez par une lame contenant une section mince d’un organoïde cortical qui contient des cellules gliales et des neurones à différents stades du vieillissement.

Les neurones vieillissants, dans un état de sénescence avec une fonction cellulaire en déclin, contiennent des niveaux élevés de bêta-galactosidase.

La section est prétraitée avec un fixateur pour stabiliser la structure cellulaire et un agent perméabilisant pour perméabiliser leurs membranes.

Placez la lame dans un récipient de coloration à laver avec un tampon pour éliminer toute trace de solution.

Colorez la lame avec une solution contenant un substrat pour l’enzyme bêta-galactosidase et incubez.

Le substrat pénètre dans les cellules, où la bêta-galactosidase clive le substrat, produisant un produit de couleur bleue qui s’accumule davantage dans les neurones vieillissants.

Lavez la section à plusieurs reprises.

Ajoutez un produit de montage anti-décoloration et laissez-le se solidifier, en assurant l’intégrité de la section tachée.

Observez la lame au microscope ; la zone avec un produit de couleur bleue intense indique les neurones vieillissants à l’intérieur de l’organoïde.

Après la cryosection des organoïdes, retir