Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:04 min • July 8th, 2025
Commencez par une lame contenant une section mince d’un organoïde cortical qui contient des cellules gliales et des neurones à différents stades du vieillissement.
Les neurones vieillissants, dans un état de sénescence avec une fonction cellulaire en déclin, contiennent des niveaux élevés de bêta-galactosidase.
La section est prétraitée avec un fixateur pour stabiliser la structure cellulaire et un agent perméabilisant pour perméabiliser leurs membranes.
Placez la lame dans un récipient de coloration à laver avec un tampon pour éliminer toute trace de solution.
Colorez la lame avec une solution contenant un substrat pour l’enzyme bêta-galactosidase et incubez.
Le substrat pénètre dans les cellules, où la bêta-galactosidase clive le substrat, produisant un produit de couleur bleue qui s’accumule davantage dans les neurones vieillissants.
Lavez la section à plusieurs reprises.
Ajoutez un produit de montage anti-décoloration et laissez-le se solidifier, en assurant l’intégrité de la section tachée.
Observez la lame au microscope ; la zone avec un produit de couleur bleue intense indique les neurones vieillissants à l’intérieur de l’organoïde.
Après la cryosection des organoïdes, retirez l’excès de solution de montage en transférant les lames dans un récipient à lames avec un couvercle, et lavez le tissu organoïde sectionné trois fois avec du PBS pendant 10 minutes à température ambiante. Ensuite, incubez les lames pendant la nuit à 37 degrés Celsius avec une solution de coloration à la bêta-galactosidase fraîchement préparée. Lavez les mouchoirs colorés trois fois avec du PBS pendant 10 minutes chacune à température ambiante pour éliminer la solution de bêta-galactosidase.
Maintenant, montez les mouchoirs lavés avec un agent de montage anti-décoloration en verre et laissez la solution de montage se solidifier pendant 30 minutes à température ambiante avant de l’observer au microscope.