Immunocoloration des interneurones dans une coupe d’hippocampe de rat

Prenez une section d’hippocampe de rat fixe contenant un interneurone rempli de biocytine, une molécule conjuguée à la biotine.

Ensuite, ajoutez une solution contenant des protéines bloquantes et un détergent non ionique pour empêcher la liaison non spécifique et perméabiliser les neurones.

Incuber avec un anticorps primaire ciblant des récepteurs cannabinoïdes spécifiques sur les interneurones.

Laver avec un tampon pour éliminer l’excès d’anticorps.

Ensuite, ajoutez un colorant fluorescent conjugué à la streptavidine et un anticorps secondaire conjugué à un fluorophore.

Pendant l’incubation, la streptavidine se lie fortement à la biocytine, ce qui permet de visualiser l’interneurone rempli de biocytine, tandis que l’anticorps secondaire cible les anticorps primaires liés aux récepteurs sur les interneurones.

Rincer avec un tampon en éliminant les molécules non liées.

Maintenant, montez la section à l’aide d’un support de montage aqueux. Placez une lamelle et scellez-la.

À l’aide d’un microscope à fluorescence, visualisez l’expression de l’interneurone et des récepteurs cannabinoïdes remplis de biocytines, ce qui permet d’analyser la morphologie de l’interneurone et la distribution