Etablissement d’un modèle de rat d’hémorragie sous-arachnoïdienne induite par injection sanguine autologue

Prenez un rat anesthésié avec le crâne exposé et une sonde implantée pour mesurer la pression intracrânienne.

À l’aide d’un point de référence sur le crâne, marquez le site cible et percez un trou.

Retirez les fragments d’os et remplissez le trou avec de la cire d’os.

Percez un autre trou. Localisez un vaisseau sanguin et fixez une sonde pour mesurer le débit sanguin cérébral.

Prenez une aiguille et insérez-la dans le cerveau jusqu’à ce que le crâne soit ressenti.

Rétractez-le légèrement pour vous assurer qu’il est placé devant le chiasma optique, où se trouvent les principaux vaisseaux sanguins.

Remplissez la chambre de l’aiguille avec du sang frais prélevé sur la queue du rat et connectez la seringue contenant du sang.

Injectez le sang dans l’espace sous-arachnoïdien rempli de liquide entre les membranes cérébrales externe et interne, ce qui augmente la pression intracrânienne, provoquant une constriction des vaisseaux sanguins.

Cela conduit à une diminution du flux sanguin cérébral, établissant un modèle d’hémorragie sous-arachnoïdienne.

Pour placer la sonde laser Doppler, faites une incision caudale de 15 millimètres sur la ligne médiane, en commençant juste en avant des yeux. Après avoir retiré le tissu conjonctif et les muscles à l’aide d’une pince, utilisez l’extrémité d’un coton-tige stérile comme régime pour identifier le bregma et les sutures coronales.

Après avoir placé l’écarteur armé, placez une aiguille vertébrale de calibre 25 dans le cadre stéréotaxique exactement sur le bregma et notez la position. Ensuite, retirez l’aiguille du bregma. Déplacez le cadre vers l’avant de 6,5 millimètres, puis replacez l’aiguille sur la ligne médiane pour marquer le côté du perçage.

Percez jusqu’à ce que la dure-mère soit identifiée sous l’os. À l’aide d’une pince droite, retirez délicatement les fragments d’os, puis remplissez la cavité de cire d’os. Ensuite, à 3 à 4 millimètres latéralement à droite du bregma et juste en avant de la suture coronale pour le laser Doppler, percez un autre trou en prenant soin de ne pas pénétrer la dure-mère.

Recherchez les vaisseaux où le laser Doppler peut mesurer le flux sanguin. Placez le laser Doppler et vérifiez les valeurs. Une valeur minimale de 100 unités de flux est requise. Si les valeurs restent acceptables après avoir retiré le microscope, ajoutez 1 goutte de colle pour fixer la sonde. Vérifiez à nouveau si la valeur est supérieure à 80 unités de flux.

Pour induire une hémorragie sous-arachnoïdienne, insérez doucement l’aiguille à travers le crâne sur la ligne médiane entre les hémisphères jusqu’à ce qu’une résistance soit ressentie en raison de la base du crâne. Rétractez l’aiguille de 1 millimètre pour assurer un placement correct juste avant le chiasma optique. Pour obtenir le résultat le plus homogène possible lors de l’injection du sang, tournez l’aiguille de 90 degrés dans le sens des aiguilles d’une montre, de sorte que la pointe de l’aiguille pointe vers la droite. Ensuite, retirez le talon aiguille.

Après un équilibrage de 15 minutes, ajustez le niveau d’anesthésie pour obtenir une pression artérielle moyenne de l’ordre de 80 à 100 millimètres de mercure. Ensuite, effectuez une analyse des gaz du sang pour confirmer que le pH, la pression partielle du dioxyde de carbone et la pression partielle de l’oxygène sont dans les paramètres physiologiques.

Ensuite, à l’aide d’une seringue de 1 millilitre avec une aiguille émoussée de calibre 23, prélevez 500 microlitres de sang du cathéter caudal. Pour éviter l’injection d’air, remplissez l’espace mort de la chambre de l’aiguille vertébrale avec du sang. Après avoir ajusté le volume de sang dans la seringue à 300 microlitres, connectez la seringue à l’aiguille vertébrale. Ensuite, en serrant fermement autour de la seringue, injectez le sang manuellement pour dépasser la pression artérielle moyenne. Observez une forte augmentation de la pression intracérébrale et une chute brutale simultanée du flux sanguin cérébral.