Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:59 min • July 8th, 2025
Commencer avec des cellules humaines génétiquement modifiées dans un milieu de croissance.
Ces cellules contiennent un système inductible par la tétracycline possédant la protéine précurseur de l’amyloïde ou gène APP et un gène de la luciférase.
Échanger avec un milieu contenant de la tétracycline et incuber.
La tétracycline se lie à la protéine activatrice, qui se lie au promoteur APP.
Cela induit l’expression des gènes et produit les protéines précurseurs qui se localisent dans la membrane cellulaire.
L’enzyme β-sécrétase clive l’APP, générant un fragment qui reste attaché à la membrane cellulaire.
La γ-sécrétase clive ce fragment, produisant des peptides β amyloïdes et libérant un composant activateur.
Cet activateur pénètre dans le noyau, se lie au promoteur de la luciférase, induit l’expression des gènes et produit des enzymes luciférase.
Remplacez le milieu par un réactif de dosage contenant le substrat de la luciférase. Le substrat se diffuse dans les cellules et réagit avec la luciférase, produisant une bioluminescence.
À l’aide d’un lecteur de microplaques, vous mesurez l’intensité lumineuse, qui reflète directement l’activité de la γ-sécrétase, une enzyme cruciale dans le
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques