Étude de la transmigration lymphocytaire à travers une monocouche de cellules endothéliales microvasculaires

Prenez une microplaque avec des inserts transwell recouverts de protéines ECM pour favoriser l’adhésion cellulaire.

Ajoutez des cellules endothéliales microvasculaires du cerveau humain, ou HBMEC, dans les inserts et un milieu de croissance dans les compartiments inférieurs.

Incuber, permettant aux cellules d’adhérer et de se développer en une monocouche. Ces cellules expriment des jonctions serrées, imitant l’endothélium de la barrière hémato-encéphalique qui limite le passage des cellules et des molécules.

Retirez le fluide. Ajoutez des cellules mononucléées du sang périphérique, ou PBMC, dans les inserts et un milieu de culture dans les compartiments inférieurs.

Incuber, c’est-à-dire permettre aux lymphocytes PBMC d’interagir avec les cellules endothéliales, puis de passer entre elles, un processus appelé transmigration.

Rincez le fond de l’insert en recueillant les cellules transmigrées collées dans les compartiments inférieurs.

Introduire des microbilles fluorescentes comme référence pour la quantification cellulaire.

Transférez la suspension dans un tube, centrifugez, jetez le surnageant et mettez-la en suspension dans un cocktail d’anticorps conjugués à des fluorophores pour