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Neurosciences
0 vues • 3:15 min • July 8th, 2025
Prenons l’exemple d’un rat soumis à une occlusion de l’artère cérébrale moyenne, limitant le flux sanguin vers l’hémisphère droit du cerveau.
La réduction de l’apport sanguin prive les cellules cérébrales d’oxygène, perturbe la régulation de l’eau, provoque un gonflement des cellules ou un œdème et entraîne une rupture de la barrière hémato-encéphalique.
Les cellules endommagées finissent par mourir, formant une zone d’infarctus.
Injectez un colorant bleu dans la veine de la queue du rat pour détecter la perturbation de la BHE.
Récoltez le cerveau, coupez-le avec des lames de rasoir et incubez les tranches dans une solution de colorant redox.
Dans les cellules vivantes, le colorant réagit avec les déshydrogénases mitochondriales et subit une réduction, rendant les tissus viables rouges.
Les zones infarctuses, dépourvues d’activité déshydrogénase, restent blanches.
Scannez les tranches pour obtenir des images haute résolution.
À l’aide d’un logiciel d’analyse d’images, appliquez un filtre bleu pour éliminer la couleur bleue, en convertissant les images en niveaux de gris.
Appliquez un seuillage pour distinguer les tissus noirs sains des tissus blancs infarctus.
Calculez la zone d’infarctus et l’œdème cérébral en pourcentage de l’hémisphère controlatéral non affecté.
Pour commencer, retirez la cervelle de rat et coupez des sections horizontales de 2 millimètres d’épaisseur avec une lame de rasoir à un seul tranchant en acier inoxydable non revêtue de 0,009 pouce. Placez les sections dans 0,005 % TTC et incubez-les pendant 30 minutes à 37 degrés Celsius. Ensuite, placez le tissu cérébral sur les lames de microscope et effectuez un balayage optique des six tranches de cerveau avec une résolution de 1 600 par 1 600 DPI. Utilisez un éditeur de photos pour ajouter un filtre bleu aux images.
Après avoir ouvert le logiciel, allez dans Image, Réglages et Mélangeur de canaux. Sélectionnez Bleu comme canal de sortie et cochez Monochrome. Cliquez ensuite sur OK. Enregistrez l’image au format de fichier JPEG. Utilisez l’outil de sélection de polygones dans la version 1.37 d’ImageJ pour sélectionner chaque hémisphère de chacune des six tranches de cerveau et l’enregistrer dans un fichier image distinct.
Pour calculer le volume de l’infarctus et l’œdème cérébral, utilisez une macro pour convertir les pixels de l’image en blanc ou en noir en fonction d’un seuil. Ensuite, fermez tous les fichiers et utilisez une deuxième macro pour comparer le nombre de pixels blancs et noirs afin de déterminer le volume de l’infarctus et l’œdème cérébral. Copiez les données brutes dans une feuille de calcul. Lors du calcul du volume de l’infarctus, corrigez l’enflure des tissus en utilisant les rapports des hémisphères cérébraux ipsilatéraux et controlatéraux. Exprimer les zones d’œdème cérébral en pourcentage des zones standard de l’hémisphère controlatéral non affecté.