Coloration immunohistochimique des fibres nerveuses dans le noyau basal de Meyner du cerveau de souris

Prenez une section de cerveau de souris fixe contenant le noyau basal de Meynert, riche en fibres nerveuses exprimant l’enzyme choline acétyltransférase.

La section est prétraitée pour désactiver la peroxydase endogène.

Ajoutez un détergent pour perméabiliser les membranes cellulaires, suivi d’une solution bloquante pour empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques.

Remplacez la solution par des anticorps primaires qui se lient à la choline acétyltransférase.

Laver avec un tampon pour éliminer les anticorps non liés. Incuber avec des anticorps secondaires marqués à la biotine, qui se lient aux anticorps primaires.

Supprimez les anticorps non liés et ajoutez des complexes avidine-biotine-peroxydase, qui se lient aux anticorps secondaires.

Laver pour éliminer les complexes en excès.

Ajoutez un substrat chromogène qui réagit avec la peroxydase, formant un précipité coloré.

Rincer à l’eau distillée pour éliminer l’excès de précipité.

Transférez la section sur une lame gélatinisée.

Ensuite, déshydratez la section en utilisant des concentrations croissantes d’éthanol, puis de xylène.

Montez la coupe et observez au microscope pour visualiser les fibres nerveuses colorées.

Pour le marquage immunohistochimique des coupes tissulaires, après avoir bloqué toute liaison non spécifique avec 10 % de sérum bovin normal dans du Triton X-100 à 0,1 %, dans une solution saline tamponnée au tris, étiquetez les sections avec l’anticorps principal d’intérêt, pendant 48 heures à quatre degrés Celsius.

À la fin de l’incubation, laver les sections trois fois, pendant trois minutes, dans une solution saline fraîche tamponnée au tris par lavage. Suivi d’une incubation avec un anticorps secondaire biotinylé approprié, pendant une heure à température ambiante.

À la fin de l’incubation, laver les sections trois fois dans une solution saline fraîche tamponnée au tris, comme démontré. Suivi d’une coloration avec le complexe avidine-biotine-peroxydase et la solution de substrat de peroxydase DAB, selon les protocoles du fabricant.

Après le lavage, montez toutes les sections d’un échantillon de tissu cérébral sur une lame gélatinisée. Laissez les échantillons sécher à l’air. Pour déshydrater les sections, immerger les échantillons deux fois, pendant cinq minutes par dilution, dans des solutions d’éthanol ascendantes séquentielles, comme indiqué, puis les éclaircir avec deux lavages de xylène de 10 minutes. Ensuite, utilisez un support de montage approprié pour placer les lamelles sur les lames.