Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:58 min • July 8th, 2025
Prenez une section de cerveau de souris fixe contenant le noyau basal de Meynert, riche en fibres nerveuses exprimant l’enzyme choline acétyltransférase.
La section est prétraitée pour désactiver la peroxydase endogène.
Ajoutez un détergent pour perméabiliser les membranes cellulaires, suivi d’une solution bloquante pour empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques.
Remplacez la solution par des anticorps primaires qui se lient à la choline acétyltransférase.
Laver avec un tampon pour éliminer les anticorps non liés. Incuber avec des anticorps secondaires marqués à la biotine, qui se lient aux anticorps primaires.
Supprimez les anticorps non liés et ajoutez des complexes avidine-biotine-peroxydase, qui se lient aux anticorps secondaires.
Laver pour éliminer les complexes en excès.
Ajoutez un substrat chromogène qui réagit avec la peroxydase, formant un précipité coloré.
Rincer à l’eau distillée pour éliminer l’excès de précipité.
Transférez la section sur une lame gélatinisée.
Ensuite, déshydratez la section en utilisant des concentrations croissantes d’éthanol, puis de xylène.
Montez la coupe et observez au microscope pour visualiser les fibres nerveuses colorées.
Pour le marqu
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