Mesure de l’absorption de la dopamine dans les synaptosomes cérébraux de souris à l’aide de dopamine radiomarquée

Récoltez des synaptosomes, des structures membranaires dérivées des terminaisons présynaptiques intactes des synapses neuronales qui contiennent des transporteurs de dopamine (DAT), à partir d’un cerveau de souris.

Remplissez les tubes à essai avec un tampon contenant des ligands et les tubes de référence avec un tampon contenant des ligands et un inhibiteur de DAT.

Ajoutez les synaptosomes.

Les ligands inhibent les enzymes dégradant la dopamine et d’autres transporteurs, empêchant la dégradation de la dopamine et l’absorption non spécifique.

Introduire de la dopamine non marquée et radiomarquée.

Dans les conditions d’essai, le DAT synaptosomal absorbe la dopamine.

Dans la condition de référence, l’inhibiteur empêche l’absorption de dopamine médiée par DAT, ne permettant que l’absorption de fond.

Ajoutez les échantillons dans des filtres en microfibres qui retiennent les synaptosomes.

Laver pour enlever la dopamine non liée.

Transférez les filtres dans des tubes à scintillation.

Ajouter un liquide à scintillation contenant un composé radiosensible.

Placez les tubes dans un comptoir à scintillation.

Les émissions radioactives de la dopamine incitent le composé à émettre de la lumièr