Hybridation in situ à l’aide de sondes oligonucléotidiques pour étudier l’expression de l’ARN dans des sections de cerveau de rat

Prenez des sections cérébrales fixes d’un rat atteint du syndrome sérotoninergique, ce qui entraîne une altération de la synthèse de l’ARN du récepteur de la sérotonine dans les neurones.

Déshydratez les tissus à l’aide d’alcool. Appliquer une solution de prétraitement pour désactiver les enzymes d’hydrolyse endogènes, empêchant ainsi leur interaction avec les réactifs de détection.

Traiter avec un tampon bouillant pour rompre les réticulations induites par la fixation, exposant ainsi les ARN cibles.

Déshydratez le tissu, dessinez une barrière hydrophobe et incubez-le avec une solution pour perméabiliser les membranes cellulaires.

Ajoutez des sondes oligonucléotidiques et incubez, ce qui permet aux sondes de s’hybrider avec les ARN cibles.

Laver pour éliminer les sondes non liées, puis incuber avec des réactifs d’amplification contenant des sondes de préamplificateur, d’amplification et de marquage conjuguées aux enzymes qui se lient aux sondes oligonucléotidiques.

Incuber avec des substrats chromogènes qui sont hydrolysés par les sondes conjuguées aux enzymes, produisant une couleur visible.

Traitez avec du xylène pour augmenter la transparence des tissus, ajoutez un milieu de mon