Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
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Commencez par une tranche de cerveau cérébelleux de souris contenant des fibres parallèles, des fibres grimpantes et des cellules de Purkinje, essentielles au contrôle moteur.
La tranche est immergée dans un liquide céphalo-rachidien artificiel, avec une électrode d’enregistrement attachée à une cellule de Purkinje et des électrodes de stimulation près des fibres parallèles et grimpantes.
Appliquez des stimuli électriques aux fibres parallèles, provoquant la libération de glutamate, un neurotransmetteur excitateur près de la cellule de Purkinje.
Les neurotransmetteurs se lient aux récepteurs du glutamate, ce qui entraîne un afflux d’ions qui active les cellules de Purkinje et génère un signal électrique.
Ajustez l’intensité du stimulus pour une réponse optimale des cellules de Purkinje.
Ensuite, délivrez des stimulations répétitives aux fibres grimpantes et parallèles.
Les stimuli des fibres grimpantes activent les canaux calciques voltage-dépendants sur la cellule de Purkinje, provoquant un afflux important de calcium.
Cela déclenche l’internalisation des récepteurs du glutamate, réduisant la sensibilité de la cellule au glutamate.
Cela induit une dépression à long terme, caractérisée par une réponse diminuée à la stimulation parallèle des fibres.
Pour l’induction de la dépression à long terme, stimulez la couche moléculaire avec une impulsion de 0,1 milliseconde et appliquez un stimulus à double impulsion pour identifier les courants postsynaptiques excitateurs de fibres parallèles. Une facilitation d’impulsion appariée et une augmentation progressive de l’amplitude par rapport à l’augmentation de l’intensité de la stimulation doivent être observées. Pour enregistrer la réponse du test, appliquez une seule impulsion de 0,1 hertz et ajustez l’intensité du stimulus de sorte que l’amplitude évoquée soit d’environ 200 picoampères.
Stimulez les fibres grimpantes au bas de la couche de cellules de Purkinje, et pour identifier les courants postsynaptiques excitateurs de fibres parallèles provoqués par l’activation de la fibre grimpante, appliquez un stimulus à double impulsion. Une dépression du pouls appariée doit être observée de manière générale ou nulle, en corrélation avec l’augmentation de l’intensité de la stimulation.