Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
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Commencez par des cerveaux de mouches drosophiles transgéniques, contenant différents types de cellules gliales hébergeant un système de recombinase spécifique aux cellules.
Il entraîne l’expression d’une protéine de surface cellulaire fusionnée à différents épitopes antigéniques sur le même type de cellules.
Traitez le tissu avec un fixateur pour réticuler les protéines et préserver l’architecture tissulaire.
Laver pour enlever l’excès de fixateur.
Ajoutez des protéines bloquantes pour masquer les sites de liaison non spécifiques afin de réduire les taches de fond.
Incuber le tissu avec un cocktail d’anticorps primaires qui se lie aux différents épitopes exprimés sur les cellules gliales.
Laver pour éliminer les anticorps primaires non liés.
Incuber avec des anticorps secondaires conjugués aux fluorophores qui se lient aux anticorps primaires.
Laver pour éliminer les anticorps secondaires non liés.
Montez le cerveau à l’intérieur d’une entretoise d’imagerie et placez une lamelle. L’espaceur crée une chambre pour le tissu, en préservant sa structure tridimensionnelle.
Différentes cellules du même type glial marquées avec différents anticorps conjugués aux fluorophores permettent de
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