Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:08 min • July 8th, 2025
Commencez avec une plaque contenant des motoneurones myélinisés en culture, des cellules nerveuses contrôlant les muscles et des myotubes, des cellules musculaires multinucléées.
Le motoneurone est relié au myotube par une jonction neuromusculaire ou NMJ, un site de transmission du signal.
Ajouter le chlorure de calcium dans le puits.
Observez sous un microscope inversé pour une imagerie en direct et enregistrez un film.
Les ions calcium pénètrent dans le motoneurone et déclenchent la libération d’acétylcholine, ou ACh, un neurotransmetteur excitateur.
Ces neurotransmetteurs se lient aux récepteurs ACh sur les myotubes, permettant aux ions sodium d’entrer et déclenchant la contraction des myotubes.
Enregistrez le film. Le logiciel génère ensuite un graphique de mouvement temporel codé en couleur pour les contractions des myotubes, où la couleur rouge indique la vitesse la plus rapide et le bleu représente la vitesse la plus lente.
Ensuite, introduisez un bloqueur neuromusculaire qui se lie aux récepteurs ACh. Cela empêche l’afflux de sodium et limite les contractions des myotubes.
Réenregistrez le film. Une diminution de la couleur rouge indique une réduction des contractions des myotubes.
Pour déclencher les contractions du myotube, ajoutez 25 millimolaires de chlorure de calcium dans chaque puits de cellules de jonction neuromusculaire différenciées. Et dans les deux minutes suivant le traitement, placez la plaque sur la platine d’un microscope inversé. À l’aide de la microscopie à cellules vivantes, enregistrez un film de la contraction du myotube pendant 20 secondes. À la fin de l’enregistrement, ajoutez 300 nanogrammes par millilitre de curare au milieu de culture et enregistrez le film pendant encore 20 secondes, avant d’ouvrir le fichier vidéo dans un logiciel d’analyse de vecteur de mouvement approprié pour l’analyse.