Réticulation des protéines de surface neuronale dans le cerveau de la souris à l’aide d’un test de réticulation chimique

Commencez avec un cerveau de souris isolé dans un tampon glacé.

Transférez le cerveau dans une matrice cérébrale, avec la face ventrale vers le haut.

Insérez des lames de rasoir pour couper en série la partie antérieure du cerveau.

Soulevez les tranches en tenant les lames ensemble, en laissant la partie postérieure derrière. Séparez les lames de rasoir et placez-les sur une surface refroidie, les tranches de cerveau vers le haut.

Sélectionnez la tranche souhaitée et extrayez la région d’intérêt.

Divisez et émincez le tissu.

Transférez le tissu haché dans un tube contenant du liquide céphalo-rachidien complété par le produit chimique BS3.

Retournez et mélangez le tube pour briser le tissu en petits morceaux, puis incubez en rotation.

BS3, un produit chimique imperméable à la membrane cellulaire, réticulent les protéines de surface neuronales comme les récepteurs GABA, tandis que les récepteurs internes du GABA restent inaltérés.

Ajoutez de la glycine pour éteindre la réaction de réticulation.

L’échantillon est prêt pour l’évaluation des niveaux de récepteurs GABA de surface.

Pour commencer, retirez rapidement le cerveau du crâne de la souris noire 6J C57 euthanasiée. Plongez-le dan