JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
0 vues • 2:10 min • July 8th, 2025
Prenez un disque intervertébral (IVD), une structure en forme de coussin située entre les vertèbres, à partir d’une queue bovine.
Positionnez-le verticalement et injectez du TNF-α recombinant, une cytokine pro-inflammatoire, dans le noyau pulpeux (NP), le noyau gélifié.
Retirez la seringue à mi-course et tirez sur le piston pour créer un vide, empêchant ainsi le reflux de TNF-α. Ensuite, retirez la seringue.
Placez l’IVD dans une chambre de bioréacteur contenant un fluide et appliquez quotidiennement une charge de pression intense.
Le TNF-α se lie à ses récepteurs sur les cellules NP, déclenchant une cascade de signalisation.
Cela active les caspases initiatrices et exécutrices, qui dégradent les protéines cellulaires et induisent l’apoptose.
Le TNF-α active également le facteur de transcription NF-κB, qui induit l’expression des gènes inflammatoires, entraînant la libération d’enzymes qui dégradent la matrice extracellulaire de l’IVD.
De plus, la charge de pression intense induit des contraintes mécaniques, dégradant davantage l’IVD.
Cela réduit la hauteur de l’IVD par rapport aux témoins non traités, établissant un modèle dégénératif et pro-inflammatoire de la maladie IVD à un stade précoce.
Après le premier cycle de chargement dynamique le premier jour, placez directement les IVD dans une boîte de Pétri en position verticale et stabilisez-les à l’aide d’une pince à épiler. Injecter le TNF alpha recombinant à l’aide d’une aiguille à insuline de calibre 30, lentement à une vitesse d’environ 70 microlitres par minute dans les DIV du groupe pathologique. Après l’injection, tirez la seringue à mi-chemin vers l’arrière et tirez sur le piston pour créer un vide qui empêche la solution injectée de fuir. Ensuite, retirez complètement la seringue de l’IVD.