Évaluation de l’état de palmitoylation des protéines de la membrane cellulaire du tissu cérébral de la souris

Prenez des protéines de membrane cellulaire dans des tissus cérébraux de souris.

Ces protéines présentent une modification post-traductionnelle avec des groupes palmitoyle, un acide gras, attachés aux résidus de cystéine.

Ajoutez un tampon réducteur et incubez à haute température pour rompre les liaisons entre les cystéines non palmitoylées, en les exposant.

Incuber avec un réactif bloquant qui se lie aux cystéines exposées, ne laissant que les cystéines palmitoylées réactives.

Transférez la solution, mélangez-la avec du chloroforme, du méthanol et de l’eau déminéralisée, centrifugez-la pour précipiter les protéines et éliminez toutes les impuretés. Ensuite, ajoutez du méthanol, centrifugez et jetez tous les contaminants restants.

Ajoutez un tampon, du sonicate pour solubiliser la pastille, puis centrifugez et éliminez les matériaux insolubles.

Appliquez un réactif de clivage pour éliminer les groupes palmitoyle des cystéines palmitoylées.

Répétez la précipitation du chloroforme-méthanol et éliminez toutes les impuretés.

Incuber avec un polymère qui se lie aux cystéines débloquées, aidant à identifier les protéines palmitoylées.

Répétez la précipitation du chloroforme-méthanol et é