INDUCTION D’UN TRAIT DE SUBSTANCE BLANCHE DANS UN MODÈLE MURIN À L’AIDE D’UN INHIBITEUR D’OXYDE NITRIQUE

Commençons par une souris anesthésiée immobilisée dans un cadre stéréotaxique avec un crâne exposé.

Marquez le bregma, puis percez un trou, commençant postérieurement au bregma et s’étendant vers l’avant, juste à gauche de la ligne médiane.

Retirez les couches de tissus pour exposer le cortex cérébral myélinisé riche en axones et appliquez des gouttes salines pour prévenir le dessèchement des tissus.

Fixez une pipette remplie d’un inhibiteur d’oxyde nitrique à un bras d’injecteur, qui est positionné à un angle pour une injection précise.

Ajustez les coordonnées stéréotaxiques et injectez l’inhibiteur dans la substance blanche du cortex cérébral, en tenant brièvement la pipette pour éviter le reflux.

Rétractez et répétez l’injection à d’autres coordonnées.

Plus tard, scellez le trou et fermez l’incision avec de l’adhésif.

Les inhibiteurs se lient aux enzymes productrices d’oxyde nitrique dans les cellules endothéliales des vaisseaux sanguins, inhibant la production d’oxyde nitrique et resserrant les vaisseaux sanguins.

Cette constriction inhibe la circulation sanguine, entraînant des lésions neuronales et la formation de lésions, développant un accident vasculaire cérébral de la substance blanche.

Commencez par fixer une pipette en verre tiré sur un tube fixé à une conduite de vide. Insérez l’extrémité tirée dans la solution L-Nio ou le traceur fluorescent L-Nio plus. Démarrez le vide et appliquez l’aspiration jusqu’à ce qu’au moins 2 millimètres de la partie de 0,5 millimètre de diamètre de la pipette soient remplis.

Mettez la pipette remplie de côté. Ensuite, placez la souris dans un appareil stéréotaxique équipé d’un microscope stéréotaxique. Après avoir anesthésié et préparé la souris pour la chirurgie conformément aux procédures approuvées, vérifiez la profondeur de l’anesthésie avec un pincement de l’orteil. Il ne devrait pas y avoir de réponse.

Ensuite, ajustez le bras d’injection à 36 degrés. Fixez un porte-pipette en verre tiré à l’extrémité distale d’un système d’injection à faible pression et fixez-le au bras d’injection. Après avoir pratiqué une incision de 1,5 centimètre sur la ligne médiane du cuir chevelu pour exposer le crâne, séchez la surface du crâne avec un coton-tige.

Ensuite, tout en regardant à travers un microscope stéréotaxique à un grossissement de 1 à 3X, utilisez un outil à micro-points pour enlever tout tissu périosté sus-jacent. Marquez le bregma avec un marqueur à pointe fine, puis utilisez une perceuse chirurgicale équipée d’une mèche chirurgicale à pointe fine pour percer une craniotomie elliptique de 2 millimètres, commençant postérieurement au bregma et s’étendant antérieurement juste à gauche de la ligne médiane.

Retirez les fragments d’os et les tissus mous sus-jacents afin que le cortex cérébral puisse être visualisé. Gardez la surface corticale humide en appliquant par intermittence des gouttes de sérum physiologique. Ensuite, fixez la pipette remplie sur le bras de l’injecteur. Alignez l’extrémité distale de la pipette avec bregma et mettez à zéro les coordonnées stéréotaxiques.

Avancez la pipette jusqu’au premier point d’injection en utilisant les coordonnées antérieure, postérieure et latérale médiale indiquées dans le tableau 1. Ensuite, avancez la pipette jusqu’à la surface corticale et mettez à zéro la mesure ventrale dorsale. Abaissez lentement la pipette jusqu’à la coordonnée ventrale dorsale.

Assurez-vous que le grossissement du microscope stéréotaxique est réglé sur 3X et que le réticule calibré peut être clairement visualisé. Visualisez la pipette inclinée de côté de sorte que le ménisque du fluide d’air ait une vue sagittale. Le ménisque doit apparaître dans le même plan focal des parois interne et externe de la pipette.

Maintenant, à l’aide d’un système d’injection à faible pression de volume, réglé à 20 PSI pour des impulsions de 20 millisecondes, injectez 100 nanolitres de L-Nio dans le cerveau. Après avoir injecté le volume total, attendez 5 minutes pour éviter le reflux dans la piste de la pipette. Ensuite, retirez la pipette et répétez la procédure d’injection aux deuxième et troisième séries de coordonnées fournies dans le tableau 1.

Après l’injection finale, retirez la pipette et placez suffisamment de cire osseuse pour remplir le site de craniotomie. Enfin, approchez les bords de la plaie du cuir chevelu et liez-la avec de l’adhésif dermique.