Immunohistochimie de coupes de tissu cérébral de souris pour cibler les neurones dopaminergiques

Prenez une lame recouverte de polymère avec des sections de tissu cérébral de souris contenant des neurones dopaminergiques exprimant la tyrosine hydroxylase, une enzyme clé pour la synthèse de la dopamine.
Tracez les coupes avec un stylo hydrophobe pour assurer une coloration uniforme.
Fixez le tissu dans une solution d’acétone-méthanol pour préserver la morphologie des tissus.
Rincez avec un tampon contenant un détergent pour perméabiliser les membranes cellulaires.
Incuber avec des anticorps primaires ciblant la tyrosine hydroxylase dans les neurones dopaminergiques, puis laver pour éliminer les anticorps non liés.
Ajouter des anticorps secondaires marqués à un colorant fluorescent, un colorant nucléaire et des inhibiteurs de RNase.
Pendant l’incubation, les anticorps secondaires se lient aux anticorps primaires, les colorants nucléaires marquent le noyau et les inhibiteurs de la RNase inactivent les RNases.
Rincer avec un tampon. Ensuite, déshydratez les sections de tissu à des concentrations croissantes d’éthanol.
Incuber dans du xylène pour éliminer le tissu.
Les sections de tissu traitées sont maintenant prêtes pour la microdissection par capture laser, ce qui permet une visualisat