Détection des modifications des histones dans les cellules de levure avec surexpression de protéines neurodégénératives

Commencer par une suspension de cellules de levure surexprimant des protéines liées à des maladies neurodégénératives.

Cette protéine surexprimée est responsable de modifications dans les protéines d’emballage de l’ADN ou les histones avec des fractions chimiques.

Ajouter de l’hydroxyde de sodium et du bêta-mercaptoéthanol puis incuber sur de la glace.

L’hydroxyde de sodium et le bêta-mercaptoéthanol lysent les cellules, libérant les protéines intracellulaires, y compris les histones.

Centrifuge le lysat pour recueillir les protéines. Jetez le surnageant.

Ajoutez un colorant de chargement à la pastille de protéine et chauffez-la pour les dénaturer.

Chargez ces protéines dénaturées et un marqueur protéique sur le gel et l’électrophorèse pour les séparer par taille.

Électrotransfère les protéines sur une membrane, lave et ajoute un tampon de blocage pour empêcher la liaison non spécifique.

Ajouter des anticorps primaires qui se lient spécifiquement aux histones modifiées.

Laver pour éliminer les anticorps non liés et incuber avec des anticorps secondaires fluorescents, qui se lient aux anticorps primaires.

Une bande fluorescente distincte confirme les modifications des histones, indiquant une