Détection de la protéine α-synucléine associée à une maladie neurodégénérative à l’aide d’un ELISA

Commençons par le tissu cérébral d’une souris transgénique surexprimant la α-synucléine mutée, une protéine neuronale mal repliée associée à une maladie neurodégénérative, immergée dans un tampon à haute teneur en sel.

Homogénéisez le tissu à l’aide d’un grand pilon, suivi d’un petit pilon pour perturber le tissu et libérer des protéines intracellulaires, y compris la α-synucléine.

Transférez l’homogénat dans un tube et centrifugez. Prélever le surnageant contenant des protéines et le diluer avec un tampon.

Ajoutez ce surnageant à une microplaque enrobée d’anticorps spécifiques à la α-synucléine prétraitée avec un agent bloquant pour empêcher la liaison non spécifique.

Incuber avec agitation, permettant à la α-synucléine normale et mutée de se lier.

Laver la plaque, puis ajouter les anticorps de détection spécifiques de la α-synucléine mutée et incuber avec agitation.

Laver à nouveau et ajouter des anticorps liés à des enzymes, puis incubation sous agitation.

Ajouter le substrat et incuber dans l’obscurité sous agitation. Le substrat réagit avec l’enzyme pour produire un changement de couleur.

Arrêtez la réaction avec un acide et mesurez l’absorbance pour quantifier la α-synucléine mutée.