Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
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Commence avec une souris anesthésiée avec une artère carotide commune exposée ou CCA.
La CCA bifurque en l’artère carotide externe, ou ECA, fournissant du sang au visage, et l’artère carotide interne, ou ICA, fournissant du sang au cerveau.
D’abord, placez une suture autour de l’ECA et resserrez-la.
Ensuite, ajoutez une suture serrée sur l’ACC sous le site d’injection pour bloquer la circulation sanguine.
Insérez une bande de papier humide sous l’ACC pour vous soutenir.
Placez un nœud lâche au-dessus du site d’injection, puis injectez des cellules cancéreuses dans l’ACC.
En raison de l’ECA suturée, les cellules se déplacent vers l’ICA pour atteindre le cerveau.
Après l’injection, retirez l’aiguille et resserrez le nœud distal de l’ACC pour éviter le reflux.
Enfin, coupez les sutures, retirez la bandelette, rincez avec une solution saline et fermez la plaie.
Au fil du temps, les cellules cancéreuses migrées se propagent et développent des tumeurs dans le cerveau.
Positionnez des pinces fines sous l’artère carotide externe et passez une suture en soie 5-0 sous l’artère. Noeudez et serrez la suture et coupez l’excédent de ligne. Placez des pinces fines sous l’artère carotide commune et passez une suture en soie 5-0 sous l’artère.
Faites un nœud et resserrez la suture à une position proximale du site d’injection proposé. Coupez l’excédent de suture en laissant environ 10 millimètres de la ligne. Coupez et humidifiez une bande d’essuie-glaces jetables à faible peluche d’environ 10 par 5 millimètres.
Pliez la bande et placez-la sous l’artère carotide au site d’injection proposé. Cela soutiendra le vaisseau pendant l’injection. Sur l’artère carotide rostrale commune au site d’injection proposé, placez une troisième ligature avec un nœud lâche. Celui-ci n’est resserré qu’après l’injection.
Agitez doucement la suspension cellulaire et aspirez 200 microlitres de suspension cellulaire dans une seringue à insuline avec une aiguille de calibre 31. Chargez la seringue dans le tourne-seringue connecté à une pédale d’activation.
Attache une fine canule avec une aiguille de calibre 31 à la seringue et amorce la ligne. Vérifiez si l’artère carotide est bien positionnée et pressurisée. À l’aide de deux pinces à angle fin, l’une tendant doucement sur l’extrémité de la première ligature et l’autre tenant l’aiguille de calibre 31, insérez lentement l’aiguille avec le biseau vers le haut dans la lumière du vaisseau sanguin, en prenant soin de ne pas la perforer.
Injectez lentement 100 microlitres de suspension cellulaire préparée plus tôt dans l’artère carotide commune à 10 microlitres par seconde. Cela délivrera 2,5 fois 10 aux cinquièmes cellules dans le vaisseau sanguin. Le succès de l’injection peut être visualisé par l’élimination du sang du vaisseau sanguin carotide.
Soulevez et resserrez doucement la ligature lâche immédiatement après avoir retiré l’aiguille pour éviter le reflux et le saignement. Coupez l’excédent de sutures et retirez le morceau d’essuie-glaces jetables humidifiés et peu pelucheux.
À l’aide d’une pipette P200, rincez deux fois la cavité chirurgicale avec 150 à 200 microlitres d’eau stérile ou de solution saline. Après avoir vérifié s’il y a des saignements, repositionnez les tissus mous, les glandes salivaires et la peau sur l’artère carotide et la trachée. Fermez la couche cutanée de l’incision à l’aide d’un porte-aiguille de suture, d’une pince et d’une suture monofilament 6-0 résorbable ou non résorbable selon un motif continu.