Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:01 min • April 28th, 2025
Commencez avec une plaque multi-puits à fond plat recouverte d’une matrice de membrane basale, qui contient un polymère extracellulaire et des protéines d’adhésion qui imitent la matrice du microenvironnement tumoral.
Introduisez un média contenant une neurosphère de cellules de gliome dérivées d’une tumeur cérébrale pédiatrique, en vous assurant qu’elle est positionnée au centre du puits.
La matrice favorise l’attachement de la neurosphère au puits.
Ajouter un réactif de suppression d’arrière-plan pour minimiser la fluorescence non spécifique.
Ensuite, introduisez des anticorps anti-CD44 conjugués au fluorophore vert.
Transfère la plaque dans un système d’imagerie de cellules vivantes logé dans un incubateur qui maintient les conditions physiologiques de la cellule.
Au fil du temps, les cellules de gliome expriment la protéine d’adhésion cellulaire CD44, qui interagit avec les protéines d’adhésion.
Cela active la voie de signalisation cellulaire et facilite la migration cellulaire de la neurosphère.
Les anticorps anti-CD44 conjugués aux fluorophores se lient au CD44 exprimé sur les cellules de gliome, les rendant fluorescentes.
L’apparition de cellules fluorescentes vertes s’éloignant de l
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