Mesures basées sur l’impédance de l’invasion des cellules cancéreuses du cerveau

Prenez une plaque d’invasion et de migration cellulaire contenant des chambres supérieures et inférieures.

La chambre supérieure contient une membrane microporeuse avec un réseau de microélectrodes en or mesurant l’impédance sur son fond. Enduisez la membrane d’une matrice extracellulaire ou d’une solution ECM.

Remplissez la chambre inférieure avec un milieu à haute teneur en sérum.

Ensuite, ajoutez du milieu à faible teneur en sérum dans la chambre supérieure et incubez pour vous acclimater aux conditions de culture.

Applique un faible potentiel électrique à travers les microélectrodes pour mesurer l’impédance de base.

Ensemez les cellules cancéreuses du cerveau dans la chambre supérieure et laissez-les s’installer sur l’ECM.

Le milieu sérique élevé agit comme un chimioattractant, guidant le mouvement des cellules vers lui.

Les cellules sécrètent des protéases qui dégradent l’ECM, permettant leur mouvement à travers les pores de la membrane vers le chimioattractant.

Lorsque les cellules migrent, elles adhèrent aux microélectrodes, augmentant ainsi l’impédance cellulaire.

Au fil du temps, de plus en plus de cellules migrent et se fixent aux microélectrodes, augmentant encore l’impédance cellulaire, ce qui reflète le potentiel invasif de ces cellules.

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p style='background-color :#ffffff ;line-height :1.38 ;margin-bottom :0pt ;margin-top :0pt ;padding :0pt 0pt 12pt ;' dir='ltr'>Cinq à six heures avant l’analyse cellulaire en temps réel, placez le système d’analyse cellulaire en temps réel dans l’incubateur de culture cellulaire. Pour mettre en place un test d’invasion, utilisez le pipetage inverse pour placer 50 microlitres de DMEM complétés par 0,1 microgramme par millilitre de gel de matrice extracellulaire dans chaque puits de la chambre supérieure d’une plaque d’invasion cellulaire.

Immédiatement après le placage, prélever 30 microlitres de la solution de matrice extracellulaire de chaque puits et placer la plaque dans l’incubateur de culture cellulaire pendant quatre heures. Pour mettre en place un programme de mesure d’impédance six heures avant la mesure, remplacez le milieu dans toutes les cultures cellulaires électroporées par un milieu à faible teneur en sérum. Sous l’onglet Mise en page du logiciel de mesure d’impédance associé, sélectionnez des puits quadruplés pour chaque condition biologique.

Sous l’onglet Schedule, définissez une étape de balayage de mesure de référence unique avec un intervalle d’une minute et définissez une deuxième étape pour mesurer l’impédance de la cellule dans les berceaux individuels respectifs pour l’expérience réelle. Une heure avant le début de la mesure de l’impédance cellulaire, ajoutez 160 microlitres de milieu, complété par 10 % de sérum bovin fœtal comme chimioattractant dans les puits de la chambre inférieure de la plaque d’invasion et de migration cellulaire.

Remplissez les puits de la chambre supérieure avec 50 microlitres de milieu à faible teneur en sérum et placez les chambres dans le berceau du système.

Cliquez sur l’onglet Message dans le logiciel pour déterminer si tous les puits sont reconnus par l’unité de contrôle. Si le message s’affiche comme prévu, la plaque dans le socle est prête pour l’expérience. Ensuite, placez les plaques complètement emballées dans l’incubateur de culture cellulaire dans le berceau du système d’analyse cellulaire en temps réel pendant une heure pour acclimater la plaque aux conditions de culture cellulaire.

Pendant que les plaques s’équilibrent, récoltez les cellules de glioblastome comme démontré et remettez en suspension les cellules de chaque condition à un taux de huit fois 10 à la cinquième cellule par 800 microlitres de faible concentration sérique moyenne.

Pour mesurer la lecture de base avant la migration, à la fin de l’acclimatation, cliquez sur le bouton Start du berceau. Une fois la mesure de référence acquise, transférez les plaques de migration et d’invasion de leurs berceaux respectifs dans une enceinte de biosécurité.

Pipette inverse 100 microlitres de cellules dans des puits de chambre supérieure quadruplés pour chaque condition biologique dans le puits approprié des plaques d’invasion et de migration cellulaires telle que programmée dans l’unité de contrôle du berceau. Après l’ensemencement, conservez les plaques dans l’enceinte de biosécurité pendant 30 minutes à température ambiante pour permettre aux cellules de se déposer uniformément sur le fond de la plaque avant de transférer les plaques dans leurs berceaux respectifs.

Cliquez sur le bouton Start du berceau pour commencer à mesurer l’impédance de la cellule. Pour visualiser les modifications de l’impédance de la cellule en tant qu’indice de cellule en fonction du temps pendant ou après la fin de l’expérience, ouvrez l’onglet Analyse des données. Pour visualiser les données de chacune des conditions respectives, soit individuellement, soit sous forme de moyennes et/ou d’écarts-types, cliquez sur les cases Options pour la moyenne et l’écart-type.

Pour exporter les données d’index de cellule vers un fichier de tableur, placez le curseur au milieu de la fenêtre d’analyse des données et faites un clic droit, dans la boîte de dialogue qui apparaît, sélectionnez Copier les données dans la liste Formater et collez les données dans une feuille de calcul ouverte. Pour lancer l’expérience, cliquez sur le bouton Libérer dans chaque station d’accueil.