Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
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Prenez une plaque multi-puits contenant des cellules de type microglie présentant une activité phagocytaire.
Incuber avec une coloration nucléaire pour marquer les noyaux.
Ajouter un inhibiteur de polymérisation d’actine au puits de contrôle négatif.
Pendant l’incubation, l’inhibiteur se lie aux filaments d’actine, inhibant la polymérisation de l’actine et la phagocytose.
Maintenez la plaque à basse température et ajoutez des synaptosomes humains marqués à un colorant sensible au pH--des fragments isolés de terminaisons synaptiques neurales.
Centrifuge la plaque à basse température pour favoriser les interactions cellule-synaptosome mais prévenir l’absorption prématurée.
Transfère la plaque vers un système d’imagerie de cellules vivantes.
Dans le puits de test, les synaptosomes sont phagocytés et fusionnent avec les lysosomes pour former des phagolysosomes. L’environnement acide lysosomal active le colorant, ce qui entraîne sa fluorescence.
Au fil du temps, dans le puits de test, davantage de synaptosomes sont engloutis, ce qui entraîne une nouvelle augmentation de la fluorescence.
Cependant, dans le puits de contrôle négatif, la polymérisation de l’actine est inhibée, empêchant l’absorptio
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