Quantification des somas de cellules ganglionnaires rétiniennes après une hypertension oculaire induite par la cautérisation

Prenez une rétine fixée chimiquement isolée de l’œil d’un rat.

L’œil présente des lésions induites par la chaleur au plexus vasculaire limbique, un réseau de vaisseaux sanguins entourant la cornée.

Ces dommages bloquent le drainage des fluides, augmentant la pression intraoculaire (PIO) et provoquant une dégénérescence des cellules ganglionnaires rétiniennes (CGR).

Traite la rétine avec une solution de perméabilisation pour perméabiliser les membranes cellulaires et nucléaires.

Applique une solution bloquante pour empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques.

Supprimer la solution de blocage.

Introduire des anticorps primaires qui ciblent un facteur de transcription principalement exprimé dans les CGR.

Laver pour éliminer les anticorps non liés.

Introduire des anticorps secondaires conjugués aux fluorophores qui se lient aux anticorps primaires.

Laver pour éliminer les anticorps non liés.

Contre-colorez les noyaux avec un colorant de liaison à l’ADN.

Lavez la rétine et montez-la sur une lame de verre à l’aide d’un support de montage approprié.

Visualisez la rétine sous un microscope à épifluorescence.

Une densité cellulaire réduite dans l’œil endommagé par rapport au témoin confirme la dégén