Induction d’une lésion cérébrale traumatique légère dans un modèle murin

Sécurise une souris anesthésiée et préparée dans un cadre stéréotaxique avec son crâne exposé.

Identifie les points de référence du crâne. Ensuite, placez un appareil de support de tête sous la tête de l’animal et gonflez-le pour éviter de l’endommager à l’oreille.

Alignez un impacteur électromagnétique à guidage stéréotaxique sur la tête.

Réinitialisez les coordonnées stéréotaxiques pour aligner précisément la sonde de l’impacteur sur la cible. Fixez un capteur de contact à l’oreille de l’animal.

Une fois que la sonde touche le crâne, rétractez-la. Réglez la profondeur d’impact souhaitée et lancez l’impact avec les paramètres appropriés.

La sonde délivre une force contrôlée au crâne, induisant un étirement axonal et un cisaillement des neurones corticaux, ce qui entraîne une lésion cérébrale traumatique légère.

Mesurez le temps de redressement de l’animal, le temps nécessaire pour retrouver une position corporelle normale après une blessure.

Évalue la souris pour détecter des fractures du crâne visibles.

Ensuite, retirez la souris du cadre, fermez l’incision et appliquez des antibiotiques.

Permet à la souris de récupérer.

Fixez la souris dans le cadre stéréotaxique à l’aide de résine acétal légère, de barres d’oreille à pointe effilée, d’une barre d’occlusion et d’un masque d’anesthésie pour souris. Ensuite, surveillez attentivement la respiration de la souris pour vous assurer de la profondeur de l’anesthésie. Appliquez un lubrifiant stérile pour les yeux sur les yeux pour éviter le dessèchement de la cornée. Stérilisez le cuir chevelu avec des tampons de povidone iodée.

Après avoir vérifié la profondeur de l’anesthésie, faites une incision d’environ 1 centimètre sur la ligne médiane du cuir chevelu entre les yeux et le cou à l’aide d’un scalpel, exposant le crâne. Laissez sécher le crâne pendant 1 à 2 minutes, puis identifiez le bregma et le lambda. Ensuite, placez l’appareil de support de tête sous la tête et gonflez le bulbe avec de l’eau jusqu’à ce qu’il appuie contre le bas de la tête de la souris mais ne soulève pas la tête loin de la barre de morsure.

Déplace l’impacteur en place au-dessus de la tête de la souris. Déployez l’impacteur en plaçant l’interrupteur à bascule d’extension-rétraction sur l’extension. Ensuite, alignez l’impacteur jusqu’à ce qu’il soit centré sur le bregma. Réinitialisez les coordonnées x et y stéréotaxiques numériques dans le lecteur stéréotaxique à 0. Ensuite, alignez la sonde sur l’emplacement de l’impact en déplaçant la sonde du bregma vers les coordonnées cibles comme médial latéral à 0 millimètre et antérieur postérieur à moins 1,6 millimètre.

Cliquez sur le capteur de contact pour l’oreille de la souris. Abaissez lentement la pointe de la sonde avec la sonde allongée jusqu’à ce que le premier contact avec la surface soit établi. Arrêtez-vous au bip. Ensuite, réinitialisez les coordonnées z stéréotaxiques numériques dans le lecteur stéréotaxique sur 0.

Inspectez soigneusement si la pointe est au ras du crâne. Ensuite, rétractez l’impacteur en plaçant l’interrupteur à bascule sur le boîtier de commande en position de rétraction. La pointe se retire et n’a plus de contact avec la tête jusqu’au moment de l’impact. Réglez la profondeur d’impact en ajustant la profondeur ventrale dorsale à moins 1,2 millimètre. Surveillez attentivement la respiration de la souris pour vous assurer de la profondeur de l’anesthésie et ajustez le niveau de gaz au besoin.

Induisez l’impact en appuyant sur l’interrupteur à bascule droit pour impacter. La pointe de la sonde descend à la vitesse affichée, reste abaissée pendant le temps de séjour défini et se rétracte. Démarrez le chronomètre immédiatement après l’émission de la blessure à la tête rapprochée ou de l’impact CHI pour enregistrer les temps de redressement. Le temps moyen du réflexe de redressement est de 5 à 15 minutes.

Évalue la souris pour détecter des fractures du crâne, des hémorragies et de l’apnée visibles. Retirez la souris du cadre stéréotaxique. Fermez le cuir chevelu en agrafant la peau. Appliquez ensuite une pommade antibiotique triple avec un applicateur stérile à bout de coton sur l’incision fermée. Remettez la souris dans une cage de maintien propre pour la récupération.