Analyse de la dynamique calcique et des modifications du potentiel membranaire dans l’endothélium artériolaire d’une souris

Fixez un tube endothélial artériolaire prélevé sur le cerveau d’une souris dans une chambre avec un flux tampon continu.

Placez la chambre dans une configuration d’enregistrement.

Introduisez un colorant fluorescent sensible au calcium. Incuber pour permettre l’absorption cellulaire du colorant.

Lavez pour enlever tout colorant non intériorisé.

Insérez une électrode dans une cellule endothéliale et enregistrez le potentiel de la membrane au repos.

Augmentez la température du bain à une température physiologique pour faciliter la liaison du calcium intracellulaire au colorant.

Excitez le colorant et mesurez la fluorescence pour quantifier les niveaux de calcium cellulaire de base. Introduisez

un médicament qui se lie à des récepteurs spécifiques couplés aux protéines G sur les cellules endothéliales, initiant une cascade de signalisation.

Cette cascade libère des ions calcium du réticulum endoplasmique dans le cytoplasme, améliorant ainsi la liaison et la fluorescence du colorant calcique.

Des niveaux élevés de calcium cytoplasmique activent également les canaux potassiques, facilitant l’efflux d’ions potassique et diminuant le potentiel membranaire.

Enregistrez les données.

Une fluorescence