Évaluation des niveaux de neurotransmetteurs excitateurs chez les rats induits par l’épilepsie chronique

Prenez un rat témoin et un rat induit par l’épilepsie chronique implantés avec une canule guide et une électrode d’électroencéphalogramme, ou EEG, dans l’hippocampe.

L’induction de l’épilepsie augmente la libération de neurotransmetteurs excitateurs, provoquant un afflux d’ions dans les cellules postsynaptiques, ce qui génère des potentiels excitateurs continus. Cela conduit à des rafales synchronisées d’activité électrique, appelées convulsions, enregistrées à l’aide de l’électrode.

Insérez une sonde de microdialyse avec une membrane semi-perméable dans la canule.

Attachez le rat à la cage d’un système d’enregistrement EEG.

Infuser un tampon physiologique dans le tissu cérébral via l’entrée de la sonde.

Assurer l’absence de crise et collecter le liquide extracellulaire via la sortie de la sonde pour évaluer les niveaux de neurotransmetteurs.

Un niveau basal élevé chez le rat épileptique indique une augmentation médiée par l’épilepsie.

Infusez un tampon à haute teneur en potassium et prélevez des échantillons.

L’augmentation du potassium prolonge l’excitabilité neuronale, déclenchant la libération continue de neurotransmetteurs.

Un pic temporaire des niveaux de neurotransmetteurs chez les rats épileptiques et témoins indique une forte augmentation induite par le potassium.

Commencez par préparer les sondes de microdialyse pour la première utilisation selon le guide d’utilisation du fabricant et remplissez-les avec la solution de Ringer. Ensuite, coupez des morceaux de tube FEP de 10 centimètres de long et connectez-les aux canules d’entrée et de sortie de la sonde, à l’aide des adaptateurs de tube de différentes couleurs. Assurez-vous que le tube touche les adaptateurs sans espace mort dans toutes les connexions.

Retirez la canule factice de son guide à l’aide de la pince à épiler en tenant fermement la tête de l’animal. Insérez la sonde de microdialyse dans la canule de guidage et utilisez de la pâte à modeler pour raffermir davantage la canule. Ensuite, connectez l’animal au système d’enregistrement EEG captif. Ensuite, placez l’animal dans le cylindre en plexiglas et laissez-le explorer le nouvel environnement. Suivez les mouvements éveillés et libres des rats.

Ensuite, connectez l’entrée de la sonde à la seringue de 2,5 millilitres avec une aiguille de calibre 22 émoussée contenant la solution de la sonnerie à l’aide des adaptateurs de tube. Enfoncez un millilitre de solution de sonnerie dans la sonde en 10 secondes en poussant le piston de la seringue de 2,5 millilitres en continu. Vérifiez que la goutte de liquide n’apparaît pas sur la sortie pour indiquer que la sonde est prête à l’emploi. Enfin, remplissez les seringues de 2,5 millilitres reliées à la tubulure FEP par des adaptateurs de tubulure avec la solution de la sonnerie et montez-les sur la pompe à perfusion. Démarrez la pompe à deux microlitres par minute et laissez-la fonctionner toute la nuit.

Après avoir vérifié par des enregistrements EEG vidéo, l’absence de convulsions dans les trois heures précédant le prélèvement de l’échantillon, arrêtez la pompe transportant la tubulure FEP des seringues canulées remplies de solution de ringer. Montez un autre ensemble de seringues de 2,5 millilitres connectées à la tubulure FEP avec des adaptateurs de tubulure remplis d’une solution de sonnerie modifiée contenant une solution de potassium de 100 millimolaires. Démarrez la pompe à 2 microlitres par minute et laissez-la fonctionner. Vérifiez l’absence de bulles d’air dans le système et assurez-vous que le tube touche les adaptateurs sans espace mort dans toutes les connexions.

Ensuite, vérifiez que la goutte de liquide apparaît sur la sortie pour indiquer que la sonde est prête à l’emploi. Ensuite, connectez le tube FEP des seringues remplies de solution de sonnerie à la canule d’entrée de la sonde chez chaque animal et attendez l’apparition de la goutte de liquide sur l’extrémité de la sortie. Connectez la sortie de la sonde au tube FEP, ce qui conduit à la collecte dans le tube à essai.

Insérez le tube FEP dans le tube à essai fermé de 0,2 millilitre avec un capuchon perforé. Et assurez-vous que le tube reste en place en le fixant avec un morceau de pâte à modeler. Après avoir fait fonctionner la pompe à 2 microlitres par minute pendant 60 minutes sans prélever d’échantillons pour équilibrer, le système a collecté cinq échantillons de dialysat consécutifs de 30 minutes dans des conditions de base. Et stockez les échantillons sur de la glace.

Après 10 minutes, changez le tube des seringues contenant 100 millimolaires de solution de potassium de Ringer à la solution de Ringer normale et laissez la pompe fonctionner. Après le prélèvement du cinquième dialysat de post-équilibrage, prélever 20 fractions de dialysat de microlitres toutes les 10 minutes pendant une heure. Ensuite, prélevez trois échantillons de dialysat supplémentaires de 30 minutes et arrêtez la pompe. Enfin, conservez les échantillons à moins 80 degrés Celsius après l’expérience jusqu’à l’analyse HPLC.