Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:34 min • April 28th, 2025
Prenez une lame chambrée avec une culture monocouche de cellules endothéliales microvasculaires de cerveau de rat, ou RBMECs.
Les cellules sont reliées par des protéines de jonction serrée liées au cytosquelette d’actine, imitant la couche endothéliale de la barrière hémato-encéphalique.
Remplacez le milieu par un milieu désoxygéné sans glucose, puis placez la lame dans une chambre d’hypoxie.
L’indisponibilité de l’oxygène et du glucose inhibe la synthèse de l’ATP. L’ATP restant est décomposé en dérivés nucléotidiques.
La déplétion en ATP entrave les pompes à calcium, élevant le calcium intracellulaire qui active les enzymes oxydoréductases.
Ensuite, remplissez avec un milieu oxygéné, puis placez la lame dans un incubateur oxygéné. Les oxydoréductases activées utilisent l’oxygène réintroduit pour dégrader les dérivés nucléotidiques, générant ainsi des espèces réactives de l’oxygène ou ROS.
ROS perturbe les interactions entre les protéines de jonction serrée et induit des voies de signalisation qui remodèlent le cytosquelette d’actine en fibres de stress, affaiblissant ainsi les interactions cellule-cellule.
La monocouche avec des interactions intercellulaires perturbées est prête pour l’a
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