Immunoprécipitation de la chromatine native des cellules de la neurosphère
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 7:03 min • April 28th, 2025
Prenez des cellules de la neurosphère dans un tampon contenant des détergents, du calcium et des inhibiteurs de protéase.
Le détergent perméabilise les cellules, tandis que l’inhibiteur inactive les protéases pour préserver la protéine cible liée à la chromatine.
Ajouter la nucléase et incuber. La nucléase utilise le calcium pour digérer la chromatine.
Ajoutez un tampon contenant de l’EDTA qui chélate le calcium, inactivant la nucléase.
Ajoutez un tampon de lyse pour lyser les cellules, libérant ainsi la chromatine.
Centrifugez et récupérez le surnageant.
Ajouter des anticorps spécifiques à la protéine cible et incuber en rotation. Centrifugez et retirez le surnageant.
Introduisez des billes magnétiques ciblant l’anticorps et incubez avec rotation.
Ajoutez un tampon de lyse pour séparer l’ADN non spécifiquement lié.
Capturez magnétiquement les billes et retirez le surnageant.
Ajoutez un tampon riche en sel pour séparer les protéines non spécifiquement liées.
Capturez magnétiquement les billes et retirez le surnageant.
Ajoutez un tampon de stabilisation, capturez magnétiquement les billes et éliminez les contaminants.
Remise en suspension dans un tampon protéinase-K pour digérer les protéines,
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