Coloration par immunofluorescence d’un tissu fibrovasculaire malade dérivé d’un patient incorporé dans du gel

Prenez du tissu fibrovasculaire malade dérivé d’un patient enrobé de gel de fibrine réhydraté, fixé et perméabilisé. Ce tissu contient des structures néovasculaires irrégulières avec des cellules endothéliales et des péricytes.

Traitez le tissu avec une solution bloquante pour éviter la liaison d’anticorps non spécifiques.

Incuber avec des anticorps primaires ciblant les protéines de surface sur les cellules endothéliales et les péricytes.

Rincer avec un tampon pour éliminer les anticorps non liés, puis incuber dans un tampon.

Après le lavage du tampon, incuber avec des anticorps secondaires conjugués à un colorant fluorescent pour se lier aux anticorps primaires.

Laver avec un tampon pour éliminer l’excès d’anticorps et incuber dans un tampon.

Après le lavage du tampon, ajoutez un colorant nucléaire pour colorer les noyaux des cellules. Rincer avec un tampon et de l’eau déminéralisée pour enlever le colorant non lié.

Transférez le tissu sur une lame de microscope.

Appliquez le support de montage et scellez-le à l’aide d’une lamelle contenant un support de montage à durcissement rapide.

Après le séchage à l’air, rangez la lame à basse température. Ensuite, imagez le tissu sous un microscope