Imagerie à haute résolution des récepteurs de neurotransmetteurs au niveau des synapses rétiniennes

Prenez une coupe rétinienne de souris sur une grille de microscopie électronique. La section contient des cellules ganglionnaires rétiniennes, ou CGR, liées synaptiquement aux cellules bipolaires. Les

cellules bipolaires présynaptiques contiennent des vésicules de neurotransmetteurs disposées en forme de ruban près de la membrane synaptique.

Les

CGR postsynaptiques présentent des récepteurs de neurotransmetteurs regroupés sur leur membrane. Ces cellules sont marquées avec la toxine cholérique sous-unité B ou CTB.

Laver avec un tampon pour maintenir le pH.

Incuber avec un tampon de blocage pour masquer les sites de liaison non spécifiques.

Incuber avec des anticorps primaires ciblant les récepteurs des neurotransmetteurs et le CTB.

Laver avec un tampon pour éliminer les anticorps non liés et maintenir le pH.

Incuber avec des anticorps secondaires conjugués à des nanoparticules d’or de différentes tailles, qui se lient aux anticorps primaires, marquant les molécules cibles.

Retirez les anticorps non liés, puis séchez l’échantillon à l’air.

Appliquez des métaux lourds qui lient les macromolécules, améliorant ainsi le contraste.

À l’aide de la microscopie électronique, identifiez les CGR à l