Surveillance en temps réel de l’activation des récepteurs odorants dans les cellules recombinantes
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:52 min • April 28th, 2025
Commencez avec une plaque multi-puits contenant des cellules de mammifères recombinantes adhérentes dans une solution de stimulation complétée par de la luciférine, un substrat luminescent.
Incuber pour permettre à la luciférine d’entrer dans la cellule.
Ces cellules expriment des récepteurs odorants liés à la membrane couplés à des protéines G olfactives et à des protéines de transport des récepteurs.
De plus, les cellules expriment des protéines Glosensor cytoplasmiques, des protéines luminescentes sensibles à l’AMP cyclique.
Ajoutez une solution odorante vaporisable dans l’espace entre les puits et placez la plaque dans un instrument luminomètre pré-équilibré avec le même odorisant.
Lancer la mesure de luminescence.
Les molécules odorantes se lient aux récepteurs odorants des cellules, activant la protéine G couplée et dissociant la sous-unité α de la protéine G, ou Gα.
La sous-unité Gα dissociée se lie à l’enzyme adénylate cyclase intégrée dans la membrane, l’activant. L’enzyme activée convertit les ATP en AMPs cycliques.
Ces AMP cycliques se lient aux protéines glosensors, modifiant leur conformation et permettant la liaison à la luciférine.
Cette interaction produit de la luminesc
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