JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
0 vues • 4:30 min • April 28th, 2025
Prenez une souris anesthésiée et rasez-lui le dos.
Fixez-le dans un dispositif stéréotaxique, avec de la gaze enroulée positionnée pour soutenir la colonne thoracique.
Désinfectez la peau, faites une incision médiane verticale et rétractez la peau.
Détache les tendons musculaires de la colonne thoracique et rétracte-les.
Identifie la vertèbre cible, puis sectionne les articulations intervertébrales pour l’enlever.
Expose la moelle épinière et insère une aiguille pliée de chaque côté de la ligne médiane.
L’insertion de l’aiguille crée des lésions superficielles dans la substance blanche, la couche externe de la moelle épinière contenant les faisceaux axonaux, tout en laissant le canal central intact.
Retirez l’aiguille, puis suturez les muscles et la peau.
Les cellules endommagées libèrent des signaux qui activent les cellules immunitaires résidentes des tissus, qui à leur tour activent les cellules souches neurales, ou NSC, entourant le canal central.
Les NSCs activés migrent vers le site de la blessure, aidant à la réparation des tissus.
Avant de commencer la procédure, utilisez une tondeuse à cheveux pour retirer la fourrure du dos d’une souris anesthésiée du milieu du dos jusqu’au cou et aux oreilles. Après avoir fixé la souris dans un dispositif stéréotaxique, placez quatre à cinq morceaux de gaze enroulée sous l’abdomen, tout en tirant légèrement sur la base de la queue pour redresser le corps et la colonne vertébrale.
Poussez le rouleau de gaze thoracique de l’abdomen de la souris vers la partie supérieure du thorax pour soutenir la colonne thoracique. Et utilisez du ruban adhésif de laboratoire pour fixer la queue et les membres dans une orientation en forme d’étoile. Après avoir désinfecté la peau exposée avec des écouvillons séquentiels d’éthanol à 70 % et de povidone iodée, utilisez une lame de scalpel numéro 10 pour faire une incision verticale parallèle à l’axe longitudinal de l’animal, du milieu des deux omoplates à la courbure de la colonne thoracique.
Rétractez la peau pour exposer les tissus mous et le contour de la colonne vertébrale, et identifiez le bord inférieur du coussinet adipeux supra-scapulaire. Ensuite, utilisez le scalpel pour couper soigneusement, mais avec force, le long des deux côtés des os vertébraux T5 à T8 et 9 pour détacher les tendons musculaires du dos de la colonne vertébrale. Repositionnez les écarteurs de manière à ce que les dents des écarteurs soient insérées dans le site d’incision de chaque côté de la colonne vertébrale, et élargissez chaque écarteur pour ajuster l’exposition jusqu’à ce que la colonne vertébrale soit suffisamment élevée, sans trop solliciter les couches musculaires rétractées.
À l’aide d’un microscope chirurgical, nettoyez soigneusement le muscle résiduel et les autres tissus mous qui recouvrent la colonne vertébrale pour exposer l’os vertébral, en serrant l’apophyse épineuse des vertèbres à l’aide d’une pince dentée et en déplaçant légèrement la pince de haut en bas pour identifier les vertèbres qui seront enlevées. Ensuite, insérez l’une des pointes d’une paire de ciseaux incurvés et émoussés de chaque côté du foramen intervertébral exposé, caudalement à la lame vertébrale à exciser, et coupez les articulations intervertébrales de connexion bilatéralement. Ensuite, soulevez la lame vers le haut et coupez l’attache supérieure de la lame pour isoler et retirer l’os.
Lors de la coupe et de l’ablation de la lame vertébrale, veillez à toujours incliner les ciseaux vers le haut, afin de ne pas endommager la moelle épinière sous-jacente.
Avec la veine médiane dorsale servant de point de repère, insérez la tige courbée à 45 degrés d’une pointe d’aiguille de calibre 30 côté biseauté vers le haut, à 1 millimètre de profondeur dans la surface dorsolatérale de la moelle épinière et à environ 0,5 millimètre latéralement de chaque côté de la ligne médiane. Déplacez l’aiguille d’environ deux millimètres de la direction caudale vers la direction rostrale, de sorte que toute la longueur du biseau soit insérée dans le cordon. Ensuite, retracez le chemin de l’entrée pour retirer l’aiguille.
Pour fermer la plaie, retirez l’écarteur et utilisez une suture résorbable 6-0 pour joindre les muscles du dos de chaque côté de la blessure le long de la ligne médiane, et une suture en soie 4-0 pour fermer la peau sus-jacente.