Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:59 min • April 28th, 2025
Prenez une lame contenant des cryosections de tissu coronal de rat fixes et perméabilisées.
Tracez le contour des sections avec un stylo hydrophobe pour créer un environnement de coloration contrôlé.
Transférez les sections dans une chambre humide pour éviter le dessèchement des réactifs et des tissus lors des étapes suivantes.
Traitez les sections avec des protéines sériques pour bloquer les sites de liaison non spécifiques.
Rincer avec un tampon pour éliminer l’excès de protéines sériques.
Incuber avec des anticorps primaires ciblant des protéines spécifiques sur la microglie et les neurones.
Laver avec un tampon pour éliminer les anticorps primaires non liés.
Incuber avec des anticorps secondaires conjugués aux fluorophores qui se lient aux anticorps primaires.
Laver avec un tampon pour éliminer les anticorps secondaires non liés. Ensuite, rincez à l’eau bi-distillée.
Appliquez un support de montage aqueux pour protéger le signal fluorescent, placez une lamelle et scellez-le.
Imagez les coupes au microscope à fluorescence pour visualiser les microglies et les neurones immunomarqués.
Séchez les bords des lames et faites une bordure hydrofuge autour du bord de la lame avec un stylo à l’aide
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