Coloration immunohistochimique de biomarqueurs dans des coupes de la neurosphère d’une tumeur cérébrale

Prenez une diapositive avec des sections de neurosphères de tumeurs cérébrales intégrées à la paraffine, des grappes de cellules souches neurales présentant des biomarqueurs de protéines nucléaires spécifiques à la tumeur.

Chauffer pour faire fondre la paraffine, l’enlever à l’aide de xylène et réhydrater le tissu en utilisant des concentrations d’alcool décroissantes.

Chauffer dans un tampon acide contenant un détergent pour démasquer les épitopes sur les biomarqueurs et perméabiliser les membranes cellulaires.

Rincez, puis traitez avec un agent oxydant pour inactiver les enzymes peroxydases endogènes, en empêchant les signaux non spécifiques.

Applique une solution de blocage pour masquer les sites de liaison non spécifiques.

Incuber avec des anticorps primaires ciblant les épitopes du biomarqueur.

Rincez, puis traitez avec des anticorps secondaires conjugués à la biotine qui se lient aux anticorps primaires.

Rincez et incubez avec une avidine conjuguée à l’enzyme peroxydase, qui se lie à la biotine.

Ajoutez un substrat chromogène et un agent oxydant.

La peroxydase utilise l’agent pour convertir le substrat en précipités colorés, en marquant l’emplacement du biomarqueur.

Contre-colorez les