Procédé d’élimination hydrophobe des tissus pour un échantillon de tissu cérébral de rat

Commence avec un échantillon de tissu cérébral, qui n’est pas transparent en raison de la présence de pigments et de lipides. Ces composants provoquent la diffusion de la lumière dans les neurones marqués par fluorescence.

Incuber séquentiellement le tissu dans des solutions avec des concentrations croissantes de méthanol pour en retirer l’eau et déshydrater le tissu progressivement.

Ensuite, traitez ce tissu avec du méthanol concentré pour éliminer l’eau résiduelle, assurant ainsi une déshydratation complète.

Ensuite, transférez le tissu dans un solvant de clarification initial contenant du dichlorométhane et du méthanol.

Incuber en secouant doucement pour permettre au solvant de pénétrer profondément dans le tissu.

Le dichlorométhane élimine les pigments et les lipides des tissus, réduisant la diffusion de la lumière et améliorant la transparence.

Enfin, transférez le tissu dans de l’éther dibenzylique, un solvant hydrophobe et incubez sans secouer.

Le solvant agit comme l’agent de clarification final qui améliore encore la transparence du tissu.

Ce processus améliore la pénétration de la lumière, permettant une visualisation plus claire des neurones marqués et de leurs connexions dans le tissu cérébral échantillon.

Incuber l’échantillon en série dans du méthanol à 20 %, 40 %, 60 %, 80 % et 100 % pendant une heure chacun à température ambiante. Ensuite, incubez-le dans du méthanol frais à 100 % pendant la nuit. Le lendemain, incubez l’échantillon dans du DCM à 66 % dans du méthanol à 33 % fraîchement préparé pendant trois heures à température ambiante en agitant. Après trois heures, incubez l’échantillon dans de l’éther dibenzylique sans agiter jusqu’à ce qu’il soit clair. Ensuite, stockez-le dans de l’éther dibenzylique jusqu’à l’imagerie.