Microscopie par immunofluorescence de cellules neurales différenciées de cellules dérivées du sang périphérique

Prenez une lame multichambre avec des lamelles enrobées de protéines contenant des cellules neurales périphériques dérivées du sang fixes et perméabilisées, y compris des cellules progénitrices neuronales, des astrocytes et des neurones.

Ajoute une solution de blocage pour bloquer les sites de liaison non spécifiques.

Incuber avec des anticorps conjugués à un colorant fluorescent qui se lient à des protéines cellulaires spécifiques, permettant l’identification des types de cellules neurales.

Laver avec un tampon pour éliminer les anticorps non liés.

Incuber avec un colorant nucléaire fluorescent pour colorer les noyaux.

Transfère la lamelle sur une diapositive avec support de montage. Ensuite, placez la lame préparée sous un microscope à fluorescence équipé de filtres appropriés.

En utilisant des longueurs d’onde spécifiques de la lumière, excitez les colorants fluorescents, les amenant à émettre de la lumière à des longueurs d’onde plus longues.

Les signaux fluorescents émis correspondent aux protéines cellulaires marquées, mettant nettement en évidence différents types de cellules neurales et confirmant la différenciation des cellules sanguines reprogrammées.

Ajouter une solution bloquante de PBS et 5 % de BSA. Bloquez les cellules à température ambiante sur une plaque à bascule pendant une heure. Préparez une dilution appropriée des anticorps dans 1 % de BSA PBS et incubez les cellules avec les anticorps sur une plaque à bascule pendant 1,5 heure à température ambiante. Lavez les cellules trois fois avec du PBS pendant cinq minutes par lavage. Incuber les cellules avec du DAPI et monter les lamelles avec un support de montage pour une visualisation au microscope.