Imagerie microscopique de neurones dans une section de cerveau de souris à l’aide d’une coloration métallique de Golgi-Cox

Commencez avec une section de cerveau épaisse qui a été colorée avec une solution de Golgi-Cox pour assombrir sélectivement les neurones et contre-colorée avec du violet de crésyle pour mettre en évidence la région du cerveau.

Placez-les sur une lame qui a été prétraitée avec un agent nettoyant pour améliorer la transparence des tissus.

Placez la lame sur la platine du microscope, appliquez de l’huile de silicone et abaissez la lentille de l’objectif jusqu’à ce qu’elle entre en contact avec l’huile.

L’huile de silicone correspond à l’indice de réfraction de la lentille de l’objectif et de la lame, ce qui permet une imagerie détaillée.

Concentrez-vous sur l’échantillon, puis ajustez l’exposition et la balance des blancs de l’appareil photo pour une qualité d’image optimale.

Concentrez-vous sur le calque supérieur pour définir la limite supérieure, puis sur le calque inférieur pour définir la limite inférieure.

Ajustez l’espacement entre les images avec un chevauchement suffisant pour capturer les détails des projections neuronales.

Répétez l’imagerie à différents endroits pour capturer les zones d’intérêt, puis superposez ces images pour créer une représentation tridimensionnelle des neurones.

Pour capturer des piles d’images haute résolution de la zone contenant le neurone d’intérêt, sélectionnez d’abord un objectif d’immersion dans de l’huile de silicone 30x 1.05 NA sur le microscope. Ensuite, appliquez 3 à 4 gouttes d’huile d’immersion de silicone sur la lame. Placez l’objectif sur la glissière, en assurant le contact entre l’objectif et l’huile. Faites la mise au point de l’image et ajustez les paramètres de l’appareil photo, y compris l’exposition et la balance des blancs dans le logiciel d’imagerie. Ensuite, définissez les limites supérieure et inférieure de la pile d’images en vous concentrant sur le haut de la section, puis en sélectionnant Définir, en regard du haut de la pile, dans la fenêtre d’acquisition d’images.

Ensuite, concentrez-vous sur le bas de la section et sélectionnez Définir à côté du bas de la pile. Réglez la distance de pas sur 1 micron en entrant 1 micron à côté de la distance entre les images dans la fenêtre d’acquisition d’image. Enfin, capturez la pile d’images en sélectionnant Acquérir la pile d’images dans la fenêtre d’acquisition d’images. Répétez les étapes précédentes pour capturer toute la zone d’intérêt, en vous assurant que toutes les piles d’images se chevauchent d’au moins 10 % sur les axes x et y.