Imagerie de l’activation neuronale de l’hippocampe dans des sections de cerveau de souris

Commencez par des sections de cerveau de souris exposant l’hippocampe dorsal, riche en neurones.

Ajoutez du peroxyde d’hydrogène pour éteindre l’activité de la peroxydase neuronale, suivi d’un lavage.

Traitez avec un tampon de perméabilisation, puis appliquez un tampon de blocage pour bloquer la liaison non spécifique.

Ajouter les anticorps primaires et incuber avec agitation. Ces anticorps se lient aux protéines marqueurs d’activation neuronale.

Laver et appliquer des anticorps secondaires conjugués à la biotine pour lier les anticorps primaires.

Rincez et introduisez un complexe avidine-biotine-peroxydase qui se lie à la biotine sur les conjugués.

Lavez à nouveau, puis ajoutez un substrat chromogène, qui est oxydé par la peroxydase pour générer un précipité brun. Arrêtez la réaction avec PBS.

Transférez les sections sur une lame recouverte de gélatine et déshydratez-les en utilisant des concentrations croissantes d’éthanol. Ensuite, nettoyez les sections en xylène et montez-les.

Place la lame sous un microscope à fond clair.

Sous éclairage lumineux, les régions non colorées transmettent la lumière et apparaissent brillantes, tandis que les neurones colorés absorbent et réfléchissent l