Imagerie in vivo à deux photons de la rétine de la souris
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:32 min • April 28th, 2025
Prenez une souris transgénique anesthésiée avec la tête fixée à un angle sur un support pour l’imagerie in vivo de la rétine de la souris.
La rétine contient des cellules ganglionnaires rétiniennes, ou RGC, exprimant une protéine marquée au fluorophore.
Appliquez du lubrifiant pour les yeux et montez une lamelle sur l’œil.
Sous un microscope, éclairer uniformément la rétine pour exciter les protéines fluorescentes dans les CGR.
En utilisant la fluorescence émise, obtenez une vue à grand champ des RGC du plan focal et des RGC flous.
Passez en mode d’imagerie à deux photons, en concentrant la lumière proche infrarouge de faible énergie dans la couche RGC.
Au point focal, l’énergie combinée de deux photons excite le fluorophore, qui libère ensuite de l’énergie sous forme de fluorescence.
Comme l’excitation est confinée à un seul point, la fluorescence des autres plans focaux est minimisée.
Capturez des images à plusieurs plans focaux le long de l’axe z pour imager l’ensemble de la couche RGC.
Appliquez des gouttes oculaires lubrifiantes sur les deux yeux de la souris. Tournez le bras principal du support de tête jusqu’à ce que la pupille d’un œil soit orientée dans l’alignement du trajet de
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