Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
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Commencez avec une souris transgénique anesthésiée avec une fenêtre d’imagerie circulaire en verre et une plaque frontale implantée sur son crâne.
Les cellules microgliales ou immunitaires et les neurones sont marqués avec des protéines fluorescentes.
Ensuite, fixez la souris sur la platine du microscope à deux photons.
Ensuite, injectez un colorant fluorescent intrapéritonéally pour colorer les vaisseaux sanguins en rouge.
Nettoyez la fenêtre d’imagerie en verre, appliquez une goutte saline et abaissez l’objectif du microscope.
Ensuite, réglez la lumière laser pour capturer une image des vaisseaux sanguins. Enregistrez le motif de ramification et les coordonnées pour localiser et imager la même région plus tard.
Maintenant, réglez le laser pour qu’il excite les protéines fluorescentes, provoquant la fluorescence de la microglie et des neurones.
À l’aide du motif de ramification enregistré, localisez la même région et capturez régulièrement des images des cellules.
Le réseau vasculaire et les neurones restent stables, tandis que les changements de position microgliale au fil du temps reflètent la dynamique immunitaire en réponse à l’activité neuronale.
Percez une ouverture circulaire
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