Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:48 min • May 29th, 2025
Commencez par une configuration de microscope à fluorescence contenant un diaphragme immobilisé avec des nerfs phréniques provenant d’une souris transgénique.
La jonction neuromusculaire du diaphragme se compose d’un motoneurone, d’une fibre musculaire et de cellules de Schwann contenant des récepteurs de l’acétylcholine et des canaux calciques.
Ces cellules ont des récepteurs d’acétylcholine marqués par fluorescence et expriment des indicateurs de calcium intracellulaires.
Un séparateur d’image fixé à la configuration permet de visualiser simultanément les deux signaux fluorescents.
Le nerf phrénique est positionné dans une électrode d’aspiration pour délivrer un stimulus électrique.
Au microscope à fluorescence, visualisez les récepteurs de l’acétylcholine pour identifier une jonction neuromusculaire.
Pour définir une fluorescence de base maximale, ajoutez une solution de chlorure de potassium pour dépolariser temporairement la membrane cellulaire. Cela déclenche un afflux de calcium intracellulaire, provoquant une augmentation de la fluorescence des indicateurs.
Ajustez les paramètres de luminosité pour éviter la sursaturation du signal de fluorescence.
Après la repolarisation, appliq
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