Microscopie à deux photons d’astrocytes et de neurones excitateurs dans un tissu hippocampique de souris dégagé

Commencez avec un tissu hippocampique de souris dégagé rendu optiquement transparent en éliminant les lipides. Le tissu est intégré dans un maillage d’hydrogel pour stabiliser les biomolécules et préserver les structures cellulaires.

Le tissu contient des astrocytes exprimant la protéine fluorescente rouge et des neurones excitateurs exprimant la protéine nucléaire verte, permettant une visualisation distincte.

Placez le tissu sur une lame et créez une chambre à l’aide de colle chaude, en laissant un petit espace.

Appliquez une solution d’adaptation de l’indice de réfraction pour hydrater le tissu et éviter les bulles, puis scellez-la avec une lamelle.

Remplissez la chambre avec une solution d’adaptation de l’indice de réfraction pour réduire la diffusion de la lumière et fermer l’espace.

Visualisez le tissu à l’aide d’un microscope à deux photons.

La lumière proche infrarouge excite les protéines fluorescentes rouges et vertes au niveau du plan focal, ce qui permet d’obtenir une imagerie à haute résolution avec un minimum de photodommages. Les émissions de fluorescence sont détectées séparément, révélant clairement la proximité spatiale entre les astrocytes et les noyaux des neuron